Для чего делают иммуноферментный анализ крови?

В последние годы в современных клиниках все чаще стал применяться иммуноферментный анализ, сокращенно ИФА. Раньше подобная технология использовалась только в узкоспециализированных научных лабораториях, теперь метод стал доступен любому нуждающемуся в нем. Анализ применяется, например, для определения таких заболеваний, как сифилис, герпес, хламидиоз, гепатит, туберкулез и множество других патологий. Также его применяют для выявления гормональных показателей и в других целях.

Сущность анализа

Иммуноферментный анализ можно разделить на исследование двух основных составляющих: иммунной и ферментной реакции.

1. Иммунная реакция – методика, позволяющая обнаружить искомый объект (молекулу, клетку, микроорганизм и т.д.).
2. Ферментная реакция – методика, с помощью которой расшифровывается иммунный анализ.

Что представляет собой проведение иммунной реакции?

Данный процесс происходит в результате соединения антигена и антитела. Что это такое? Антиген – особые молекулы, находящиеся на поверхности клеток и несущие в себе информацию об этих клетках. Они подразделяются на индивидуальные и видовые.

Индивидуальный антиген – молекула, присущая только одному индивидууму. Таких одинаковых молекул в природе не существует. Видовой антиген – молекула, присущая только определенному виду живых существ.

На отдельно взятой клетке находятся как индивидуальные, так и видовые антигены. Так устроено для более успешного выявления иммунными телами чужеродных соединений.

Как именно происходит идентификация и что за этим следует? Иммунное тело связывается с антигеном и, если распознает его как “своего”, уходит. Но если был обнаружен “чужак”, подозрительная клетка немедленно уничтожается. Вероятность ошибки предельно мала.

Антитело – молекула, расположенная на поверхности иммунного тела. Именно посредством антитела иммунная клетка связывается с определенной клеткой через антиген. Если все в порядке, происходит разъединение. В противном случае антитело посылает сигнал подобным себе, чужеродный антиген окружается, захватывается, и начинается процесс уничтожения всей клетки. Подобное явление называется иммунным комплексом.

Антитела по природе являются белковой структурой, их другое название – иммуноглобулины. Они также разделяются на пять различных видов. Каждый вид связывается с антигенами в различных областях организма. Иммуноферментный анализ в основном имеет дело с двумя из них.

Именно этот принцип связи антитела с антигеном, его безошибочное распознавание природы объекта, положено в основу иммуноферментной диагностики. Точность такого анализа довольно высока.

Что собой представляет процесс проведения ферментной реакции?

Ферментативная реакция – процесс превращения одного вещества в другое под действием определенного фермента. Вещество, на которое осуществляется воздействие, называется субстратом.

Для каждого вида субстрата необходимо подобрать свой фермент, определить их сродство.

Вещество, полученное в результате их взаимодействия, называется продуктом реакции. В итоге любой фермент вызывает определенного рода реакцию. Имеется множество возможных вариантов. Но иммуноферментный анализ использует лишь с десяток из них.

Колориметрический метод анализа

Колориметрия – определение концентрации вещества по окрашенному раствору. Для этого специально подбираются особые ферменты, продуктом реакции которых являются вещества, имеющие окрас. По плотности окраса раствора соответственно определяется количество искомого вещества. В этом случае существуют две зависимости: прямая и обратная. В первом случае чем насыщеннее цвет раствора, тем больше в нем определенного вещества. При обратной зависимости чем больше количества вещества в растворе, тем меньше плотность окраса у раствора. На основе этих взаимосвязей для удобства был создан специальный калибровочный график. Используя этот график, применяется особый прибор – колориметр. В него нужно лишь раз занести все необходимые данные, а расшифровка происходит автоматически. С его помощью легко определить, не превышена ли допустимая норма искомого антигена. Из ферментов наиболее часто применяется: авидин, щелочная фосфатаза, пероксидаза.

Итак, как именно происходит иммуноферментный анализ? Метод проведения анализа делится на два типа: прямой и непрямой. Прямой тип иммуноферментного анализа. Для проведения анализа к антителам прикрепляется специальная метка, тот самый субстрат, с которым будет взаимодействовать фермент.

1. Берется любой биоматериал: это может быть кровь, соскоб, мазок и т.д. Проба располагается в специальной форме и оставляется так на полчаса. За это время антигены успевают закрепиться на ее стенках. Потом туда же добавляют антитела, выведенные специально для реакции с определенным антигеном. Смесь оставляется на несколько часов, чтобы антитела успели закрепиться к антигенам. Чем больше определенных антигенов, тем больше антител к ним закрепляется.
2. Антитела добавляются в переизбытке, лишним телам закрепиться будет некуда. А если искомого антигена в пробе вовсе нет, то все антитела останутся свободными. Чтобы определить это, необходимо удалить из формы все лишние антитела, т.е. просто хорошо вымыть ее несколько раз.
3. Теперь самое интересное – проведение ферментативной реакции. В промытую форму добавляется окрашивающий фермент. Как уже было сказано, окрас придает реакция между введенным ферментом и прикрепленной к антителам меткой – субстратом. Теперь весь принцип анализа становится предельно ясным, все остальное чисто профессиональные детали.

Непрямой тип анализа иммуноферментного. Здесь идет вариант с усложнением, разделяется он на два этапа:

1. Помещение неотмеченных антител в антигенную среду.
2. Размещение отмеченных антител на неотмеченные тела.

Получается двойной контроль, антитела обычно берутся от животных. Несмотря на то что процедура занимает гораздо больше времени, предпочтение отдается именно ей, в связи с большей точностью результата.

Стоит отметить, что еще специалистами применяется жидкофазный и твердофазный иммуноферментный анализ крови, иммунофлюоресцентный тип, но это уже глубоко профессиональная тема. Из всех преимуществ метода можно отметить:

1. Повышенную точность и чувствительность метода.
2. Раннее диагностирование заболевания.
3. Слежение за состоянием процесса заболевания.
4. Скорость анализа.
5. Удобство проведения анализа.

Из недостатков стоит упомянуть вероятность ложных результатов, но это случается нечасто.

Анализ применяется при диагностике таких заболеваний, как различные гепатиты, ВИЧ, герпес, сифилис, гонорея, трихомониаз, хламидиоз, а также онкологии, аллергии и иммунодефицитный синдром.

Не исключается возможность проведения анализа на уровень различных гормонов в крови.

Все полученные результаты должны расшифровываться только квалифицированным специалистом во избежание возможных ошибок. Подобный результат, конечно, довольно редок, но не исключен.